Les équipements de la plateforme PIC-GIN

Les microscopes champs large sont dédiés au suivi du développement de cellules fluorescentes ou non, sur de courtes ou longues durées. Pour limiter la dégradation des échantillons observés lors de l’acquisition, un compromis doit être trouvé en favorisant des temps d’exposition courts et les changements d’illumination rapides. Certains microscopes à champs large sont équipés d'un système de régulation de température et/ou de CO2 garantissant la survie des échantillons sur de très longues durées. Les platines motorisées permettent de mémoriser plusieurs zones et de les acquérir les unes après les autres au cours d’une même expérience. Ces outils sont simples d’utilisation et répondent à la majorité des besoins. Leur limitation provient du fait de l'illumination de tout le champs d'observation qui induit un manque de résolution notamment sur les échantillons épais, ce qui peut conduire à utiliser des microscopes confocaux à balayage laser ou un spinning disk.

Services

- Observation XYZT
- Acquisitions sur de courtes ou longues durées
- Images à multi-marquages
- Thermorégulation & contrôle CO2 pour maintien des échantillons
- Multi-positionnement pour suivre plusieurs champs au cours d’une acquisition
- Échantillons fixés ou vivants
- Nombreux support d’échantillon utilisables (boite pétri, lame, boite multi-puits…)

Mode d’accès

- Assistance
- Autonomie (après formation)
- Prestation de service sur demande

Equipements

• LEICA DMI6000 / ROPER
  Inversé, thermorégulation, multipositions, scanslides, imagerie calcique
  
• ZEISS AxioObserver
  Inversé, thermorégulation & contrôle CO2, multi-positions, acquisitions multiparamétriques, time lapse
  
• ZEISS Axiovert 200M
  Microscope inversé pour observation de marquages en fluorescence. 
  

Le compromis idéal pour ceux qui recherchent la résolution et une faible phototoxicité. Le « spinning-disk » allie la rapidité du microscope champ large à la résolution d’un confocal. Cette technique utilise des lasers pour illuminer les échantillons et des caméras ultra-sensibles pour détecter le signal fluorescent. A la différence du confocal à balayage laser, le spinning disk illumine l’ensemble de la zone d’observation de manière simultanée permettant de réduire la durée d’acquisition et de réduire la photo-toxicité et permet d’accéder ainsi à l’imagerie 4D (3D + temps).

Services

- Acquisition XYZT en fluorescence et lumière blanche
- Multi-marquage
- Acquisitions sur de courtes ou longues durées
- Images à multi-marquages
- Thermorégulation & contrôle CO2 pour maintien des échantillons
- Déplacement en profondeur rapide et repositionnement précis (Platine Piezo)
- Multi-positionnement pour suivre plusieurs champs au cours d’une acquisition
- Échantillons fixés ou vivants
- Nombreux supports d’échantillon utilisables (boite pétri, lame …)
- Acquisitions Haute résolution via le module LIVE SR

Mode d’accès

- Assistance
- Autonomie (après formation)
- Prestation de service sur demande

Equipements

• SPINNING DISK ZEISS Axio Observer Z1 / ROPER
  Alliance d’une bonne résolution et d’une faible phototoxicité
  
• Module LIVE SR pour microscopie à haute résolution

La plateforme de microscopie photonique PIC GIN dispose de plusieurs microscopes confocaux. Ils permettre la réalisation de coupes optiques fines au sein d’un tissu/d’une cellule et capturent uniquement le signal fluorescent issu du plan focal en se débarrassant de la fluorescence parasite des plans supérieurs et inférieurs contrairement à la microscopie à champ large. Ceci donne une très bonne résolution axiale, mais les échantillons vont souffrir de la phototoxicité induite par les sources lasers diminuant la capacité d’observation au cours du temps. Les inconvénients de la microscopie confocale et la relative lenteur d'acquisition (balayage laser point par point) pouvant être contrecarré par des systèmes de type spinning disk pour les études sur le vivant.

Parmi les microscopes à balayage laser on distingue deux catégories, les microscopes confocaux mono-photon et microscopes confocaux bi-photons.
La microscopie bi-photonique utilise un laser IR pulsé femtoseconde permettant de pénétrer l'échantillon biologique plus en profondeur (1mm) et de limiter le photoblanchiment des fluorophores ainsi que les photodommages de l'échantillon. L'excitation à 2 photons en microscopie biphotonique provient uniquement du point focal permettant d'obtenir une section optique d'échantillons épais (sans pinhole) et ainsi de faire une reconstitution 3D. La microscopie biphotonique couplée à la photoactivation (optogénétique, décageage de glutamate…) et à l’électrophysiologie permet l’imagerie fonctionnelle (imagerie calcique…) in vivo de cellules individuelles (neurones, astrocytes) dans le cerveau de rongeurs anesthésiés.

Services

- Observation XYZT (multipositions) et dans le temps
- Images multi-marquages
- Lasers UV pour marquage nucléaires (type DAPI, Hoechst)
- Thermorégulation et contrôle CO2 pour maintien des échantillons
- Échantillons vivants ou fixés
- Analyse spectrale
- FRAP, FRET, 2D STED
- Module AIRYSCAN (haute résolution)

Mode d'accès

- Assistance
- Autonomie (après formation)
- Prestation de service sur demande

Equipements

• ZEISS LSM710/AIRYSCAN
  Microscope inversé, analyse, spectrale, thermorégulation, FRAP, FRET, module Airyscan
  
• LEICA TCS SPE
  Microscope inversé, pas de laser UV, pas de régulation température ni CO2
  
• ZEISS 7MP
  Microscope droit, 3 NDD (épicollection), large platine motorisée, anesthésie gazeuse, laser IR 680-1080m
  
• STEDYCON ABBERIOR
  Microscope inversé, 4 channels pour imagerie confocale, 2DSTED possible en 2 couleurs 561nm et 640 nm, laser de déplétion 775 nm
  
• LAVISION BIOTEC TriMScope
  

Images de microscopie confocale
Images de microscopie biphotonique

La microscopie TIRF (Total Internal Reflection Fluorescence) permet d’imager une section optique d’une épaisseur de l’ordre comprise entre 20 et 200nm. En TIRF, seule la surface de l’échantillon en proximité immédiate de la lamelle est observée. La haute résolution axiale offerte par cette technique en fait un instrument de choix pour les observations membranaires ou les études du cytosquelette.

Services

- Étude de récepteurs membranaires
- Étude de l’exocytose/endocytose
- Étude de l’adhésion cellule/substrat
- Étude du cytosquelette et ses protéines associées, in Vitro
- Etudes de smTIRF (Single molecule

Mode d'accès

- Assistance
- Autonomie (après formation)
- Prestation de service sur demande

Equipement

• NIKON / ROPER
  Microscope inversé, thermorégulation, chauffe objectif, lasers 491 et 561nm, Optosplit II
  

AIRYSCAN

Nouvelle technologie confocale pour une microscopie plus sensible et de haute résolution

Avec le nouveau détecteur AIRYSCAN installé sur le confocal LSM 710 ZEISS, les utilisateurs peuvent obtenir une résolution 1,7× plus élevée dans toutes les dimensions spatiales. Une sensibilité améliorée donne une meilleure qualité d’image. L’ensemble du processus d’imagerie peut être réalisé avec des protocoles de préparation d’échantillons et de marquages standards.
 

LIVE SR

Le Live-SR est une technique d'imagerie basée sur l'illumination structurée avec un traitement d'image en cours d'acquisition. Combiné au spinning disk, cela permet d'obtenir des acquisitions rapidement avec une haute résolution d'image ce qui fait du live SR la solution idéale pour l'imagerie sur cellules vivantes.
 

Scanner de lames équipé d'un chargeur de 100 lames. Il permet la numérisation des échantillons en lumière transmise, en polarisation et en fluorescence et la création de lames virtuelles.

Applications

- Echantillons fixés uniquement
- Immunofluorescence multimarquages, immunohistochimie (TMA, coupe de cerveau de souris, rat...), polarisation, lumière transmise

Mode d'accès

- Assistance
- Autonomie (après formation)
- Prestation de service sur demande

Equipement

• ZEISS :  Axioscan Z1

  

Installation du light sheet Février 2019

Ce système permet l'acquisition d'images macroscopiques en fluorescence et en 3D.

Applications

- Echantillons transparisés

Mode d'accès

- Assistance
- Autonomie (après formation)
- Prestation de service sur demande

Equipement

• LAVISION BIOTEC :  Ultramacroscope II
  

• STEDYCON 2D

Avec le nouveau module STEDYCON (Abberior) installé sur un microscope à épifluorescence conventionnelle (Zeiss), les utilisateurs auront accès à un nouveau microscope confocal et à la microscopie superrésolution STED 2D. Ce module STEDYCON permet d'obtenir une résolution ~60nm dépendante du fluorochrome et de l'objectif utilisé

Applications

- Acquisitions confocales XYZ en fluorescence (4 longueurs d'ondes possibles)
- Multi-marquage
- Déplacement en profondeur rapide et repositionnement précis (Piezo placé sur objectif)
- Échantillons fixés seulement
- Support d’échantillon utilisables (boite pétri, lame …)
- Acquisition en Super résolution 2D STED possibles pour 2 longueurs d'ondes   

Mode d'accès

- Assistance
- Autonomie (après formation)
- Prestation de service sur demande

Equipement

• STEDYCON: Abberior

La stéréologie est une méthode pour l'histologie quantitative qui permet de quantifier directement sous microscope et avec précision le nombre de cellules, la longueur des fibres, ainsi que la surface et le volume des structures ou régions biologiques.

Applications

- Acquisitions et analyses quantitative d'images en transmission

Mode d'accès

- Assistance
- Autonomie (après formation)
- Prestation de service sur demande

Equipement : MBF

• Microscope  :  BX 53 Olympus droit
  •Objectifs : x2, x10, x20, x40, x60, x100
  •Caméra : couleur
  •Logiciel : StereoInvestigator

Une salle informatique est à disposition des utilisateurs de la plateforme pour le transfert des données des utilisateurs extérieurs et le traitement des images.

Mode d'accès

- Assistance
- Autonomie (après formation)
- Prestation de service sur demande

Equipement

• Logiciels IMARIS, Zen Blue, MetaMorph, Fiji installés sur PC